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产品[

黄曲霉**B1检测[产品打印页面]

]资料
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产品名称: 黄曲霉**B1检测
产品型号: r1101
产品展商: R-Biopharm
简单介绍
生物及食品酶法分析试剂盒,T-2**快速检测试剂,黄曲霉**M1检测试剂


黄曲霉**B1检测的详细介绍

黄曲霉**B1检测试剂

酶标**分析定量测定黄曲霉**B1试剂盒。德国公司R-Biopharm制造(中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)

RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15(产品编号:R1211

简介

    采用竞争酶标**法定量测定谷物,饲料,花生,干果及其它食品中的黄曲霉**B1。试剂盒中包括了所有检测用的试剂。该试剂盒有96个试验孔包括标准试验,如果进行定量分析,必须有微孔板酶标仪。

样品制备

谷物/饲料:粉碎,甲醇/水提取,过滤,稀释

时间要求:(以10个样品为例)

谷物/饲料………………………………….……大约30分钟

测试时间………………………………………….大约1小时

(与样品数量多少无关)

检测下限    1ppb

回收率      80-100%

交叉反应

Aflatoxin B1…………………………………………….100%

Aflatoxin G1…………………………………………..大约29%

Aflatoxin B2………………………………………….大约13%

Aflatoxin G2…………………………………………大约3.2%

Aflatoxin M1…………………………………………大约1.5%

1.  用途

Aflatoxin B1 30/15竞争酶标**法定量测定谷物,饲料中的黄曲霉**B1

2.  概要

黄曲霉**主要是两种霉菌Aspergillus flavus  A.paraticus的二级代谢物。这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。黄曲霉**B1属于自然*强烈的致癌物质。

黄曲霉**B1作为毒性*高的的分析物,它一般产生于玉米,花生,巴西坚果和棉花种子中。

鉴于这种霉菌**的毒性,欧洲国家做出了相近的限量,对黄曲霉**B1的限量为2ppb,对黄曲霉**总量的限量为4ppb

使用RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15检测试剂盒,能够快速而准确的检测谷物,饲料和其他食品中的黄曲霉**B1

3  测定原理

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对黄曲霉**B1抗体的捕捉抗体。加入标准或样品溶液、黄曲霉**酶标记物和黄曲霉**抗体。游离黄曲霉**与黄曲霉**酶标记物竞争结合黄曲霉**抗体,同时黄曲霉**抗体与固定在板孔的捕捉抗体相连接。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质/发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将微红色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色产生由蓝色变成黄色。在450nm处测量,吸光值与样品中的浓度成反比。

4.  提供的试剂

每一个盒中的试剂足够进行96个测量(包括标准测定孔)

盒中的材料如下

1×96孔板(12条 X  8孔)包被有捕捉抗体

6×黄曲霉**B1标准液,1.3 ml/瓶

浓度为:0ppb,1ppb, 5ppb10ppb20ppb50ppb

黄曲霉**B1的甲醇/水溶液

1×酶标记物(6ml………………………………….红色帽

过氧化物酶标记物的黄曲霉**B1

1×黄曲霉B1抗体(6ml……………………………黑色帽

1×基质/发色剂(10ml)……………………………..蓝色帽

1×反应停止液(14ml)....…………………... ……黄色帽

为1N硫酸

1×洗涤缓冲液

为10Mm的磷酸缓冲液(pH7.4),包含0.05%的Tween20

*   样品的10倍稀释倍数已经考虑,因此,样品中黄曲霉B1的浓度可以直接在标准曲线读取。

5需要的材料但盒中不提供

5.1设备

----微孔板酶标仪(450nm)定量分析用

----100ml量筒

----样品提取用玻璃器皿:漏斗、50ml容量瓶

----粉碎机

----振荡器

----Whatman NO.1或相当的滤纸

----50ul,100ul,1000ul微量加样器

5.2 试剂

----甲醇

----70%甲醇溶液:准备70%甲醇溶液,70ml甲醇与30ml蒸馏水混合。

----蒸馏水或去离子水

6.  操作者应该注意之事项

----标准液含有黄曲霉**B1,要特别小心,应戴手套,避免试剂接触皮肤

----使用过的玻璃容器*好用pH7的次氯酸溶液(10%V/V)浸泡过夜

----反应停止液为1N硫酸,避免接触皮肤

----不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀杂使用会引起 

  灵敏度的降低

----不要交换使用不同批号的盒中试剂

7.   储存条件

----保存试剂盒于2-80C。不要冷冻

----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封

----标准物质对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下

----基质/发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下

8. 试剂变质的迹象

红的基质/发色试剂若显蓝色表明发色剂变质,应当弃之。

0标准的吸光度值小于0.6个单位 (A450nm<0.6)时,表示试剂可能变质。

9. 样品处理 

样品应当在阴凉避光之处保存

在分析前将代表性的样品粉碎,彻底混均

----称取5g 粉碎的样品于适当容器中,加入25ml 70%甲醇溶液

----强力振荡3分钟(用手或振荡器)

----用Whatman NO.1或相当的滤纸进行过滤

----取1ml滤液加入1ml蒸馏水稀释

----取50ul稀释液用于试剂盒分析

*根据需要可以增加样品量,但甲醇溶液的量也应相应增加 (例如:样品10g+50ml 70%甲醇溶液

注意

如果样品中黄曲酶**的浓度比预计的浓度高,样品需要进一步稀释。请注意加入到微孔中分析的样品必须是比例为35/65的甲醇/水溶液。

10.  酶标**分析程序

10.1测定之前注意事项

1. 用之前将所有试剂回升至室温(20-25℃)。

2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。 

3. 在使用中不要让微孔干燥。

4. 在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。

5. 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖子盖住微孔板。

10.2包被有抗体的微孔板条

锡箔袋沿横向边压封线外侧剪开。取出需用数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2-80C。不要冷冻.

10.3标准液

黄曲霉**B1标准液直接应用,样品的10倍稀释倍数已经被考虑,因此,样品的黄曲霉B1的浓度可以直接在标准曲线读取。

10.4  洗涤缓冲液

在试剂盒中提供一包洗涤缓冲液的粉剂,一包粉剂溶解于1升的蒸馏水中,制备好的洗涤缓冲液在4oC条件下保存4周。

方法二:

将小袋里粉剂只用100ml蒸馏水溶解得到一个10倍的缓冲液浓缩液。此溶液在室温(20-25°C)下,可保存8周。

使用时,1倍的浓缩液+9倍的蒸馏水稀释即可得到待用的洗涤缓冲液

10.5测定程序  (在20-25 oC条件下操作)

1.将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架,标准及样品做平行,并记录标准及样品的位置。

2.加入50ul的标准或处理好的样品到各自的微孔中,每个标准和样品必须使用新的吸头。

3.加入50ul酶标记物(红色帽)到微孔底部。

4.加入50ul黄曲霉抗体(黑色帽)到微孔底部,轻轻地在桌面振摆酶标板,使之混合。在室温(20-25 oC)孵育30(+/-1)分钟

5.倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。每孔注入250ul洗涤缓冲液。再次倒出孔中的液体,完全除去孔中的液体,重复操作洗涤步骤两次以上。

6.加入100ul基质/发色试剂(蓝色帽)到微孔中,充分混合并在室温暗处孵育15(+/-1)分钟。

7.加入100ul反应停止液到微孔中,混合好在450nm处测量吸光度值,以空气为空白,15分钟内读取光度值。

11.  结果

所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以**个标准 (0标准) 的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值。

标准的吸光度值(或样品)

----------------------------------x 100= %吸光度值

0标准的吸光度值

计算的标准值绘成为一个以黄曲霉**B1浓度(ng/kg)的半对数坐标系统曲线图,校正曲线在5-20ppb范围内应当成为线性,相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。

12.  灵敏度

RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15试剂盒的*低检测下限为大约1ppb

黄曲霉**B1检测

13.  特异性

RIDASCREEN黄曲霉**B1试剂盒的特异性通过对相应的物质进行交叉反应性分析而得到:

Aflatoxin B1………………………………………..……100%

Aflatoxin G1…………………………………………大约29%

Aflatoxin B2………………………………………..大约13%

Aflatoxin G2……………….………………………...大约3.2%

Aflatoxin M1………….……………………….……..大约1.5%

14. 再现性

由三个不同的实验结果确定了室内精密度,图2显示出RIDASCREEN Aflatoxin B1 30/15试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应黄曲霉**B1浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。

黄曲霉**B1检测

15.  回收率

谷物类样品黄曲霉**B1的回收率80-100%,平均变异系数大约为8%

16.  参考文献

见试剂盒中提供的英文原版说明书。

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