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黄曲霉毒素M1检测试剂盒[产品打印页面]

]资料
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产品名称: 黄曲霉毒素M1检测试剂盒
产品型号: R1111
产品展商: R-Biopharm
简单介绍
黄曲霉毒素M1检测试剂盒


黄曲霉毒素M1检测试剂盒的详细介绍

订货号:R1111
产品名称:黄曲霉毒素M1检测试剂盒
产品英文名称:Aflatoxin M1
包装:96次检测
产品介绍:如下
产品说明:
采用竞争酶标免疫法定量检测牛奶、奶粉和奶酪中的黄曲霉毒素M1,孵育时间1小时

黄曲霉毒素M1检测试剂

RIDASCREEN? Aflatoxin M1

简介

RIDASCREEN?  Aflatoxin M1  30/15产品编号: (R1111)

采用竞争酶标免疫法定量检测牛奶、奶粉和奶酪中的黄曲霉毒素M1

试剂盒中包括了所有检测用的试剂。该试剂盒有96个试验孔(包括标准试验)

如果进行定量分析,必须有微孔板酶标仪。

(中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)

样品制备

牛奶:脱脂

奶粉:还原、脱脂

奶酪:提取、离心

时间要求:(以10个样品为例)

牛奶/奶粉………………………….…….…….…大约0.5小时

奶酪………………………………….….………….大约2小时

孵育时间时间……………………….….………….大约1小时

检测下限

牛奶/奶粉:5ppt

奶酪:50ppt

回收率

牛奶:大约95%

奶粉:大约95%

奶酪:大约102%

交叉反应

黄曲霉毒素M1………………………………………….100

黄曲霉毒素M2…..……………………………………….30

1. 产品用途

RIDASCREEN? Aflatoxin M1 30/15试剂盒利用竞争性酶免疫分析方法,用于定量检测牛奶、奶粉和奶酪中的黄曲霉毒素M1。

2. 概述

黄曲霉毒素是Aspergillus flavus 和 Aspergillus parasiticus等霉菌的代谢产物,能致癌,高毒。

黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢产物。经摄入含有黄曲霉毒素B1饲料的奶牛产出的牛奶中,其中便含有黄曲霉毒素M1。由于黄曲霉毒素M1相当稳定,巴氏灭菌法也无法将其杀灭,所以检测黄曲霉毒素M1不仅要在饲料原料中检测,而且在最终产品中也需要进行鉴定。自1999年一月开始,欧盟就制定了黄曲霉毒素残留的检测限,黄曲霉毒素M1的检测限为0.05 μg/l (50 ppt)

使用RIDASCREEN?  Aflatoxin M1 30/15可以精确定量检测牛奶、奶粉和奶酪中的黄曲霉毒素M1。

3. 测定原理

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对黄曲霉毒素M1的特异性抗体。加入标准或样品溶液和在洗板后加入黄曲霉毒素酶标记物,游离黄曲霉毒素M1与黄曲霉毒素M1酶标记物竞争结合黄曲霉毒素M1抗体的结合位点(竞争性酶免疫分析方法)。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。加入底物/发色剂到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色产生由蓝色变成黄色。在450nm处测量,吸光值与样品中黄曲霉毒素M1浓度成反比。

4. 提供的试剂

每一个盒中的试剂足够进行96个测量(包括标准测定孔)

盒中的材料如下:

1×96孔板(12条 X  8孔)包被有黄曲霉毒素M1抗体

黄曲霉毒素M1标准液,1.3 ml/瓶

浓度为:0 ppt, 5 ppt10 ppt20 ppt,40 ppt,80 ppt

黄曲霉毒素M1的牛奶缓冲液

酶标记物(1.3ml……………………………….红色帽

过氧化物酶标记物的黄曲霉毒素M1

底物/发色剂(12ml)…………………………….. 蓝色帽

微红色,包含四甲基苯醌

反应停止液(14ml)....…………………... ……黄色帽

为1N硫酸

缓冲液1(20ml)

样品稀释缓冲液

缓冲液2(12ml)....…………………... …….…白色帽

酶标记物稀释缓冲液

洗涤缓冲液

为10Mm的磷酸缓冲液(pH7.4),包含0.05%的Tween20

5需要的材料但盒中不提供

5.1设备

----微孔板酶标仪(450nm)

----离心机

----巴氏吸液管

----刻度吸量管

----50ul,100ul,400ul微量加样器

----只用于奶酪检测

----振荡器

----蒸发器

5.2 试剂

----甲醇

----n-庚烷

----二氯甲烷

----PBS-缓冲液,pH 7.2

0.55g  NaH2PO4 x H2O+ 2.85g Na2HPO2H2O +9gNaCl , 加入蒸馏水至1000ml

6.  操作者应该注意之事项

----标准液含有黄曲霉毒素M1(致癌),要特别小心,应戴手套,避免试剂接触皮肤

----使用过的玻璃容器较好用pH7的次氯酸溶液(10%V/V)浸泡过夜

----反应停止液为1N硫酸,避免接触皮肤

----不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀杂使用会引起灵敏度的降低

----不要交换使用不同批号的盒中试剂

7.   储存条件

----保存试剂盒于2-80C不要冷冻

----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封

----标准物质对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下

----无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下

8.  试剂变质的迹象

发色试剂若显色表明发色剂变质,应当弃之。

0标准的吸光度值小于0.6个单位 (A450nm<0.6)时,表示试剂可能变质。

9. 样品处理

9.1. 牛奶

----取牛奶样品,用冷冻离心机(3500g ,10℃)离心10分钟去除脂肪

(如没有冷冻离心机,可将样品先冷却到10℃,再离心)

----离心后用巴氏吸液管彻底去除上层奶油。

----取脱脂牛奶用于检测(每孔100μl

9.2. 奶粉

----用天平称取10g奶粉到容量瓶加去离子水到100ml

(还原牛奶)

----震荡5分钟使充分溶解。

----按照9.1牛奶样品处理步骤进行

9.3. 奶酪

代表性的样品应该研磨,充分混合。整个均质过程不要加入任何液体。

如果奶酪表面呈现出不同状态,则不要取奶酪表面作为样品,否则将影响检测结果。

----称取2 g研磨过的奶酪,装入玻璃离心管中。

----加入40ml二氯甲烷,放在振荡器上震荡15分钟。

----滤后取10ml滤液60 °C氮气吹干

----将吹干残留的油状物用0.5 ml甲醇、0.5 ml PBS缓冲液(参见5.2.1 ml庚烷充分混溶解。

----离心: 15分钟 / 2700 g / 15 °C 

----完全除去上层庚烷层。

----用巴氏移液管小心移取部分甲醇水层

----100 μl甲醇水层400 μl缓冲液1稀释成为含10%甲醇的溶液

----每孔用100 μl进行检测。 

备注:如果需要进一步稀释溶液,则使用缓冲液1进行稀释。

10.  酶标免疫分析程序

10.1测定之前注意事项

1. 用之前将所有试剂回升至室温(20-25℃)。

2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。 

3. 在使用中不要让微孔干燥。

4. 在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。

5. 在所有孵育过程中,避免光线照射,用盖子盖住微孔板。

10.2 黄曲霉毒素M1酶标记物

Aflatoxin M1 酶标记物(红帽)为浓缩液。由于稀释了的酶标记物稳定性不好,因此只稀释需用量的酶标记物。稀释前酶标记物应轻轻振荡混匀。酶标记物用缓冲液2(白帽)以1: 11的比例稀释400 μl浓缩液+ 4.0 ml 缓冲液,足够4个微孔板条32孔检测)

10.洗涤缓冲液

在试剂盒中提供一包洗涤缓冲液的粉剂,一包粉剂溶解于1升的蒸馏水中,制备好的洗涤缓冲液在4oC条件下可以保存4周。

10.4 包被有抗体的微孔板条

锡箔袋沿横向边压封线外侧剪开。取出需用数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2-80C。不要冷冻。

10.5  测定程序  (在20-25 oC条件下操作)

1.将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架,标准及样品做平行,并记录标准及样品的位置。

2.  加入100ul的标准或处理好的样品到各自的微孔中,轻轻震板混合,在室温(20-25 oC)暗处孵育30分钟。

3.倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中液体。每孔注入250ul洗涤缓冲液(见10.3)再次倒出孔中的液体,完全除去孔中的液体,重复操作洗涤步骤两次以上。

4.加入100ul酶标记物(红色帽)到微孔底部,轻轻震板混合,在室温(20-25 oC)暗处孵育15分钟。

5.倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中液体。每孔注入250ul洗涤缓冲液(见10.3)再次倒出孔中的液体,完全除去孔中的液体,重复操作洗涤步骤两次以上。

6.加入100ul底物/发色剂到微孔中,混合后在室温(20-25 oC)暗处孵育15分钟。

7.加入100ul反应停止液到微孔中,混合好在450nm处测量吸光度值,以空气为空白,15分钟内读取光度值。

11.  结果

所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准 (0标准) 的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值。

标准的吸光度值(或样品)

────────────── × 100= %吸光度值

0标准的吸光度值

计算的标准值绘成为一个以黄曲霉毒素M1浓度(ng/l)的半对数坐标系统曲线图,校正曲线在10-40 ng/l ppt)范围内应当成为线性,相对应每一个样品的浓度可以从标准曲线上读出。

为了得到样品中黄曲霉毒素M1的含量(ng/l),在标准曲线上读取的浓度必须乘以相应的稀释倍数。样品的稀释倍数如下:

牛奶/奶粉........................…………………….................1

奶酪....................................................……………….... 10

R-Biopharm开发出用于计算ELISA试剂盒检测结果的专用软件RIDA? SOFT,可以向当地分销商索取该软件。

12.  灵敏度

RIDASCREEN?  Aflatoxin M30/15试剂盒的较低检测下限为大约5 ppt,按照样品处理记录,牛奶、奶粉的检测限为5 ppt,奶酪的检测限为5 0ppt

黄曲霉毒素M1检测试剂盒

13. 特异性

RIDASCREEN?黄曲霉毒素M30/15试剂盒的特异性通过对相应的霉菌毒素交叉反应性分析而得到:

交叉反应:黄曲霉毒素M1....................................... 100 %

黄曲霉毒素M2.........……......................... 30 %

14.  再现性

由三个不同的实验结果确定了室内精密度,图2显示出RIDASCREEN?  Aflatoxin M30/15试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应黄曲霉毒素M1浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。

黄曲霉毒素M1检测试剂盒

15.  回收率

牛奶的回收率大约 95 % ,平均变异系数约14 %

奶酪的回收率大约为102 % ,平均变异系数大约为11 %

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